2×GenRec 單段重組試劑盒
                          產品特色

                            產品概述:

                            2×GenRec 單段重組試劑盒是一款簡單、快速、高效的單片段DNA定向克隆產品,本試劑盒可以將PCR產物定向克隆至任意載體的任意位點。將載體在克隆位點進行線性化,并在插入片段PCR引物5'端引入線性化克隆載體末端序列,使得插入片段PCR產物5'和3'最末端分別帶有和線性化克隆載體兩末端對應的完全一致的序列(20 bp~40 bp)。將這種兩端帶有載體末端序列的PCR產物和線性化克隆載體按一定比例混合,在重組酶的催化下,僅需反應15-30 min即可進行轉化,完成定向克隆??寺£栃月士蛇_90%以上。試劑盒中預混了重組酶和重組反應所需緩沖液,并添加了特殊成分,可顯著提高重組克隆效率。

                            產品組成:

                            2×GenRec Master Mix

                            產品特點:

                          • 簡單高效的定向無縫克隆
                          • 靈活的序列設計,無需考慮酶切位點
                          • 無需PCR純化步驟
                          產品說明

                            使用說明:

                            1、反應體系

                            冰上配制如下反應體系。

                            2×GenRec Master Mix         10 μL

                            線性化克隆載體                                   A ng

                            插入片度(PCR擴增產物                   B ng

                            ddH2O   Up to 20μL

                            注:如果不慎將液體粘在管壁,可通過短暫離心使其沉入管底。

                            GenRec Master Mix重組反應體系最適DNA使用量為線性化片段0.03pmol。該摩爾數對應的DNA質量可由以下公式計算獲得:

                            片段添加量(ng= 0.02×片段堿基對數(bp)(對應的片段濃度為0.03 pmol

                            2、重組反應


                            1. 在冰上解凍2×GenRec Master Mix,顛倒混勻。
                            2. 在無菌管中加入載體和片段(按上述要求),用無菌水補足到10μL,最后加入10 μL 2×GenRec Master Mix,用移液器輕輕吸打混勻避免氣泡產生。
                            3. 50℃恒溫反應15-30min,在冰上放置3-5min


                            3、轉化


                            1. 取化學轉化感受態細胞于冰上解凍。
                            2. 取上述反應液10 μL加入到感受態細胞中充分混勻。冰浴10min。
                            3. 將離心管置于42℃水浴鍋中熱激90s,然后迅速放回冰上,使細胞冷卻2~3min。
                            4. 向離心管中加入已預熱的無菌LB(或SOC)培養液600μL,37℃恒溫振蕩培養45~60min。
                            5. 短暫離心棄上清,吸取100 μL的新鮮LB培養基重新懸浮,將菌液均勻涂布在含有適當抗生素的平板上。將平板倒置,于37℃過夜培養。


                            4、 克隆鑒定

                            菌落PCR。用無菌的槍頭或牙簽將單個菌落挑至20~50μL LB 培養基中混勻,直接取1μL作為PCR模板,使用2×Taq DNA Polymerase Master進性菌落PCR實驗。

                            注意事項:

                          • 為達到最優的重組效果,請保證體系中PCR片段和載體的質量,建議DNA樣品A260/280>1.8,濃度>40ng/ul。
                          • 當得到的PCR產物條帶單一時,可無需純化,產物可直接用于重組。
                          • EDTA等金屬離子螯合劑對該產品有抑制作用,必須保證反應體系中不含該類螯合劑。
                          產品內容
                            產品名稱 目錄號 規格 價格
                            2×GenRec 單段重組試劑盒

                            CL07010

                            10次 ¥375元

                            CL07020

                            20次 ¥625元

                            CL07050

                            50次 ¥1000元

                            說明書
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